基于DNA熔解曲线技术的金银花种质鉴定(2)
取100 mg实验材料，液氮环境下研磨，采用改良CTAB法提取样品总DNA[9]。经琼脂糖凝胶电泳检测后用核酸定量仪检测定DNA浓度，调整DNA终浓度约50 mg·L-1，作为模板用于PCR扩增。
2.2 PCR扩增与熔解曲线分析
以不同种质的金银花DNA为模板，在Light Cycler 480Ⅱ型实时荧光定量PCR仪上进行PCR扩增及熔解曲线分析。25 μL PCR反应体系，包括10×buffer 2.5 μL，dNTP 1 μL，正反向引物各0.25 μL，LC Green Plus 2 μL，rTaq酶1 μL，DNA模板1 μL及dd H2O 17.8 μL。PCR反应及熔解曲线程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，X ℃退火30 s，72 ℃ 延伸30 s，共35个循环；再延伸72 ℃ 7 min；PCR结束后进行熔解曲线分析：95 ℃ 变性1 min，40 ℃ 1 min形成异源双链DNA ......
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2.2 PCR扩增与熔解曲线分析
以不同种质的金银花DNA为模板，在Light Cycler 480Ⅱ型实时荧光定量PCR仪上进行PCR扩增及熔解曲线分析。25 μL PCR反应体系，包括10×buffer 2.5 μL，dNTP 1 μL，正反向引物各0.25 μL，LC Green Plus 2 μL，rTaq酶1 μL，DNA模板1 μL及dd H2O 17.8 μL。PCR反应及熔解曲线程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，X ℃退火30 s，72 ℃ 延伸30 s，共35个循环；再延伸72 ℃ 7 min；PCR结束后进行熔解曲线分析：95 ℃ 变性1 min，40 ℃ 1 min形成异源双链DNA ......
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